制備液相流動相通過高壓泵進入系統(tǒng)，樣品溶液通過注射器進入流動相，流動相加載到色譜柱（固定相）中。由于樣品溶液中各組分在兩相中的分配系數(shù)不同，經(jīng)過兩相反復(fù)吸附－解吸分配后，各組分的運動速度有很大的不同。它被分離成一個單獨的組件，然后依次從列中流出。當樣品濃度通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號并傳送給記錄器，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來。

 

　　制備液相溶于流動相中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相發(fā)生作用（吸附、分配、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

 

　　液相色譜是現(xiàn)在食品實驗室中應(yīng)用非常廣泛的一款儀器，但是還有很多小伙伴對它的原理、使用維護等知識不太了解。今天小編就從HPLC概述、工作原理、結(jié)構(gòu)組成、常見故障及維護、HPLC應(yīng)用等方面來給大家科普下HPLC的基礎(chǔ)知識。

 

　　色譜圖其實簡單地講是一個橫坐標是時間縱坐標是電信號的二維圖譜。液相色譜法，你可以簡單地想象，固定相是一個多空海綿狀的柱形結(jié)構(gòu)，樣品在孔洞中進進出出。因為各個物質(zhì)的吸附能力不同，所以才會在色譜圖中拉開距離。

 

　　對于樣品污染沉積，先用40～50度的純水，低速正向沖洗柱子待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)的提高流速沖洗柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘，對于第2種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇＋異丙醇（4＋6）沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品的污染情況而定），在用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，然后甲醇沖洗，正向沖洗柱子30分鐘以上。